大家好！這篇文章是關(guān)于原代培養(yǎng)的入門知識，向剛?cè)腴T的同學(xué)科普這個實驗的基礎(chǔ)。

包括以下內(nèi)容：

1. 原代培養(yǎng)的概念和流程

2. 分離組織的操作和注意事項

3. 解離組織獲取細胞的三種常見方法

原代培養(yǎng)是指細胞分離之后至第一次傳代之前的細胞培養(yǎng)階段，之后細胞就轉(zhuǎn)變成細胞系。

原代培養(yǎng)可分為4個步驟：

1. 獲取樣品
   

2. 分離組織

3. 解剖或解離組織

4. 接種于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)

用于原代培養(yǎng)的樣品中可來源于2類，一是實驗室樣本，包括實驗動物的器官、組織，例如胚胎、腸道等；二是臨床樣本，例如通過手術(shù)過程分離出來的病人組織。

分離組織

1. 在取材時可以盡量多去除脂肪和壞死的組織。
2. 使用鋒利的手術(shù)刀將組織切碎，以減小對組織的損傷

獲取細胞

獲取組織之后，我們要把細胞從組織中分離出來繼續(xù)生長，這個操作可分為兩種:

1.將組織塊貼附于適宜的基質(zhì)中，細胞可從組織塊向外遷移生長，這個操作過程叫原代外植;

2.將組織塊用機械法或酶消化法處理獲得細胞懸液，接種細胞懸液，其中部分細胞最終將黏附于基質(zhì)開始生長。

如果所取組織很小，則適于用原代外植法；如果組織較大，可用酶消化法以獲得更多的細胞。

軟的組織適合于用機械法解離，一些硬的組織，如果產(chǎn)物的多少并不重要，或者從纖維間質(zhì)組

織分離松散黏附的細胞，也可用機械法分離。

胰蛋白酶處理

酶處理方法主要分為胰蛋白酶和膠原酶處理，而胰蛋白酶的反應(yīng)條件來劃分又可以分為冷胰蛋白酶和溫胰蛋白酶兩種。

• 切碎或“溢出"，切割作用或被切表面的破損使細胞釋放出來
• 篩網(wǎng)擠壓，用注射器芯將組織擠壓過篩網(wǎng)
• 注射器吸打，將組織吸入注射器中，通過-個大孔徑的針頭或?qū)Ч軐⒁后w快速打出
• 用吸管打碎，用大孔徑的吸管吸取組織塊上下吹打

2 不同種類的細胞應(yīng)采用相應(yīng)的解離方法，例如，胰蛋白酶比膠原酶作用強，建立單細胞懸液更高效；膠原酶不能解離上皮細胞，但這一特性成為它的一個優(yōu)點，可利用它使上皮細胞與間質(zhì)細胞分離并保持上皮細胞團的活力。機械法比酶消化法快，但對細胞損傷大。

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