91精品国产91热久久久久福利,后入式日本美女午夜视频在线观看,久久久久久久久夜精品,亚洲欧美另类唯美清纯

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 用磷酸化抗體做Western Blot時(shí),要注意哪些?

    用磷酸化抗體做Western Blot時(shí),要注意哪些?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1490次

    今天給大家分享一下在用磷酸化抗體做Western Blot時(shí),應(yīng)該注意些什么。


    1.警惕內(nèi)部敵人

    一定要在 lysis buffer 中加入蛋白酶抑制劑,還要加入一定量的磷酸酶抑制劑,因?yàn)榻M織或細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放出大量磷酸化蛋白的死對(duì)頭——內(nèi)源性蛋白磷酸酶,催化磷酸化蛋白(R-p)的去磷酸化,導(dǎo)致不同于正常生理狀態(tài)的差異。因此,外源性加入蛋白磷酸酶抑制劑,抑制磷酸化蛋白的去磷酸化,維護(hù)蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài),否則即使 band 壓出來(lái)也會(huì)很淺,結(jié)果也不可信。


    2.低溫能讓他們緊緊地?fù)肀?duì)方

    加一抗后最好 4 度過(guò)夜,低溫能讓抗體和目的蛋白緊緊地?fù)肀?duì)方。為什么?因?yàn)榈鞍卓乖谀ど峡康氖俏锢砦?,高溫下容易脫落。膜上的抗原脫落了,結(jié)合效率會(huì)低。4 度也可使一抗重復(fù)使用多次。畢竟磷酸化的抗體都挺貴的。(土豪隨意)磷酸化的蛋白只占總的蛋白量的極少部分,就像聯(lián)誼舞會(huì)上讓來(lái)賓多相處一會(huì)產(chǎn)生 couple 的概率會(huì)大很多那樣,過(guò)夜可以保證抗體和蛋白有充分的結(jié)合時(shí)間。二抗則室溫 1 小時(shí)即可。


    3.磷酸化抗體哪家強(qiáng)?

    當(dāng)然是 Cell signaling 公司。他家做的磷酸化抗體不錯(cuò),尤其是 MAPKs 磷酸化抗體。最好根據(jù)廠商的 protocol 來(lái)操作實(shí)驗(yàn),這是實(shí)驗(yàn)成功的保證。


    4.他們不宜“喝奶"

    建議用含 5%BSA 的 TBST 稀釋 phospho-p38 等抗體,效果不錯(cuò),而不是用常見的含 5%nonfat milk 的 TBST。因?yàn)槊撝毯姿峄鞍棕S富,是奶中磷元素的來(lái)源之一。


    5.如何避免磷化蛋白君和總蛋白君在膜上“打架"?

    研究完某一蛋白的磷酸化情況后一般也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量。但兩者的條帶位置一樣,怎么做?可以這樣:壓完磷酸化抗體后,把相同的 membrane 做 strip 后再壓總蛋白抗體,然后再 strip 一次,再壓內(nèi)標(biāo) actin。


    6.聽 marker 的,沒錯(cuò)

    做磷酸化蛋白 WB 時(shí),除了目標(biāo)蛋白的 band 以外,往往會(huì)出現(xiàn)非特異性的 band。磷酸化抗體 不好的話,甚至?xí)撼龇翘禺愋缘?band,而沒有你想要的 band,所以壓片以后,一定要根據(jù) markers 比對(duì)一下,你壓出的 band 分子量是否正確。


    7.洗滌也大有學(xué)問

    洗滌對(duì)最后的背景影響也較大,millipore 最近的說(shuō)明書推薦用雙蒸水洗滌,效果很明顯,具體可以這樣:1st and 2nd 抗體之間,DDW 5min X3 次,2nd 抗體后,DDW 5min X3 次,TBST  5min X1 次,DDW rinse 3-4 次。對(duì)比 TBST 洗滌的 membrane,效果有一定差距,背景有效降低,即使壓片 30min,背景仍然是可以忽略的。





產(chǎn)品中心 Products
自拍偷在线精品自拍偷99九色-国产在线日韩欧美91-成人性生交大片免费看r链接-黄色日本黄色日本韩国黄色| 青青草视频成人在线公开-激情中文字幕一区二区三区-亚洲国产精品综合久久网各-日本中文字幕有码高清| 婷婷激情五月天第四色-岛国片av在线免费观看-久久综合久久一区二区-91青青草原免费观看| 久久超碰97中文字幕亚洲-亚洲成人精品在线一区二区-亚洲天天操夜夜操狠狠操-久久午夜鲁丝片午夜精品| 成人深夜视频免费在线观看-国产极品裸体av在线激情网-欧美色区国产日韩亚洲区-中文字幕番号免费观看| 日韩少妇高潮免费在线观看-亚洲中文字幕乱码在线观看-日本高清一区二区三区高清-亚洲午夜天堂av毛片| 粉嫩小粉嫩小国产小视-老熟妇人妻久久中文字幕麻豆网-蜜臀av在线播放国产-成年人的三级视频网站| 亚洲一区二区日韩精品在线观看-白浆高潮国产免费一区二区三区-热久久这里只有精品99-亚洲精品在线观看中文字幕| 华人精品在线免费观看-国产熟女精品一区二区三区-国产成人午夜视频网址-女女同性女同一区二区三区九色| 日本在线观看一区二区免费-日本一区二区精品在线观看-老湿机午夜免费在线观看-成人在线永久免费观看| 精品视频人妻少妇一区二区三区-人妻中文字幕一二三区-日本老熟妇成熟老妇人-东京热国产精品二区三区| 五月婷婷丁香免费视频-四虎永久免费观看在线-一品道亚洲欧美日韩精品-日韩一级黄色片在线播放| 午夜福利国产原创精品-久久综合激情日本熟妇-国产熟女50岁一区二区-国产另类视频一区在线| 亚洲精品国产精品乱码不-亚洲天堂精品自拍偷拍-风骚少妇久久精品在线观看-一区二区在线观看视频在线观看| 国产四虎视频在线观看-日本一区二区三区暖暖视频免费-91人妻人人澡人人添人人爽-在线日本高清日本免费| 国产在线精品一区二区中文-亚洲小说欧美另类激情-97碰久日韩视频在线观看-日本一道本高清不卡区| 国产福利一区在线观看蜜臀av-最新天堂中文在线官网-成人精品天堂一区二区三区-国产精品久久久久久久人貌| 在线观看日韩不卡视频-深夜福利成人羞羞免费视频-日韩欧美精品综合另类-黄色特级一级片中文字幕| 亚洲av成人精品日韩一区二区-日本50岁成熟丰满熟妇-欧美日韩久久婷婷一区二区-亚洲成人天堂在线观看| 国产精品人成在线播放蜜臀-老司机午夜福利视频在线-亚洲激情av免费观看-国产情侣91在线观看| 国产一级片内射在线视频-亚洲少妇无套内射激情-成人午夜性色福利视频-夜夜嗨视频无套实战丰满少妇| 色婷婷av一区二区三区网-日韩在线不卡一二视频-中文字幕乱码免费在线视频-黄片欧美免费在线观看| 91亚洲综合成人在线-久久精品亚洲av少妇-日本av一区在线视频-9国产精品久久久久麻豆| 日韩av毛片在线播放-亚洲一区二区在线观看网站-18禁网站在线免费观看-亚洲精品夜夜黄无码99| 青青草视频成人在线公开-激情中文字幕一区二区三区-亚洲国产精品综合久久网各-日本中文字幕有码高清| 加勒比中文字幕久久av-久久黄色美女三级久一点黄-国产精品无套高潮久久-久久婷婷综合色拍亚洲| 国产大量自拍露脸在线-国产精品综合色区在线观-性色av一区二区三区制服-最新91精品手机国产在线| 华人精品在线免费观看-国产熟女精品一区二区三区-国产成人午夜视频网址-女女同性女同一区二区三区九色| 国产精品蜜桃久久一区二区-久久精品熟女亚洲av麻豆蜜臀-日本一区二区精品色超碰-伊人一区二区三区久久精品| 狠狠操夜夜操天天干天天-午夜一级视频在线免费观看-我要看欧美一级黄色录像-91嫩草国产亚洲精品| 伊人久久大香线蕉综合av-久久久中文字幕人妻精品一区二区-青草在线免费观看视频-国产清纯白嫩美女蜜臀av| 成熟女人毛茸茸的免费视频-91麻豆精品国产自产在线游戏-国产男女猛烈无遮挡免费视频-一级黄片国产精品久久| 成年深夜在线观看视频-成人国产av精品在线-av乱亚洲一区二区三区-亚洲精品综合一区二区在线| 在线视频国产一区二区三区-亚洲欧美日韩国产经典-性插亚洲香蕉在线视频-亚洲成人国产超级黄色| 日本黄网站三级三级三级-91网址免费在线观看-肥老熟女性强欲五十路-无套内谢少妇高朝毛片| 亚洲五月六月丁香缴情久久-国产精品国产三级国产一区-人妻中文字幕一区二区三区四区-精品在线视频尤物女神| 国产视频深夜在线观看-在线播放亚洲欧洲亚洲-不卡日韩av在线播放-国产午夜视频在线观看| 人妻精品一区二区视频免费-99热视频免费在线观看-亚洲av第一第二第三-乱码人妻精品一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av不片-色播放视频在线观看视频在线播放-色综合91久久精品中文字幕-午夜视频网一区二区三区| 正在播放后入极品美少妇-亚洲一区二区三区自拍麻豆-国产亚洲精品成人久久-av老司机亚洲精品久久| 亚洲一区二区三区免费视频观看-日韩情爱视频在线观看-丝袜美足在线视频国产在线看-日韩美女啪啪不卡视频|