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轉(zhuǎn)染HGF-1牙齦成纖維細胞, 質(zhì)粒大小10646bp
發(fā)布時間: 2021-07-05 點擊次數(shù): 1124次1.可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞,懸浮細胞,如T細胞,NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等;
2.可高效率轉(zhuǎn)染sirRNA、小分子到任何哺乳動物細胞;
3.轉(zhuǎn)染細胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑;
轉(zhuǎn)染條件:
細胞密度:60左右
質(zhì)粒DNA濃度:648ng/ul
質(zhì)粒DNA大?。?0646bp
培養(yǎng)板:6孔板
轉(zhuǎn)染試劑用量:8ul
質(zhì)粒DNA用量:電訊
轉(zhuǎn)染試劑:AD600150,Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染時間:48小時
血清:z7010-500 胎牛血清
細胞凍存:CE70100T無血清細胞凍存液
細胞活力檢測:K009-500,cck8
重要指導(dǎo)方針:
-質(zhì)粒DNA必須溶解在ddH 2 O中。如果溶解在Buffer中,轉(zhuǎn)染效率會下降70%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。
-質(zhì)粒DNA必須去內(nèi)毒素,否則轉(zhuǎn)染效率會下降70%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。
- 在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時,不能使用其他試劑稀釋核酸或轉(zhuǎn)染試劑。只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑按照1:1的關(guān)系直接混合即可。否則,轉(zhuǎn)染效率將下降80%,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。
-檢查并與轉(zhuǎn)染試劑混合后,用移液管吹吸10-15次以充分混合,確保管壁無液體殘留。
- 將核酸與轉(zhuǎn)染試劑混合并在室溫下孵育至少 10-15 分鐘。
- 將復(fù)合物加入細胞培養(yǎng)板并輕輕混勻,將板置于 CO 2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
- 在整個轉(zhuǎn)染實驗過程中,細胞可以在*培養(yǎng)基中培養(yǎng),而不是使用無血清培養(yǎng)基。
- 如果轉(zhuǎn)染后顯微鏡下觀察到白色或黑色圓形顆粒,則為轉(zhuǎn)染試劑的新材料顆粒。
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