91精品国产91热久久久久福利,后入式日本美女午夜视频在线观看,久久久久久久久夜精品,亚洲欧美另类唯美清纯

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > PCR擴增沒條帶?關(guān)于PCR擴增的技巧總結(jié)

    PCR擴增沒條帶?關(guān)于PCR擴增的技巧總結(jié)

    發(fā)布時間: 2024-02-19  點擊次數(shù): 750次

    簡介:

    首先,如果你已經(jīng)設(shè)計了引物,PCR擴增沒有條帶,請這樣做:

    使用第一次的PCR產(chǎn)物作為模版(1~2ul即可),再進行一次PCR。


    那你要重新學習PCR擴增了!這篇內(nèi)容,涵蓋了實驗中可能遇到的PCR擴增問題和詳細的解決辦法,主要是如何培養(yǎng)問題解決問題的思考能力,你必須要知道!


    PCR擴增主要包括以下幾個組分:1)引物;2)酶;3)dNTP;4)Buffer;5)CDNA或DNA。注:現(xiàn)今大部分PCR酶試劑盒一般都是酶,dNTP和Buffer的預混液。


    因此,需要從引物,酶,cDNA和DNA模版下手,進行分析。


    一共有以下三步:

    第一步,一定要確定的是-cDNA。

    每個基因在不同組織,不同時期中表達量是不同的。首先要確定你的基因在哪個組織,哪個時期表達最高,確認之后就選這些組織和時期,否則很難做出來。


    問題:怎么查找目的基因在哪個組織和時期中表達高?

    答:1)數(shù)據(jù)庫。例如NCBI數(shù)據(jù)庫。


    2)文章。查詢你目的基因的別人做過的文章,看看他們使用的什么。


    3)新的基因,沒有數(shù)據(jù)庫記載,沒有報道,什么都不知道。使用幾種組織的混合的cDNA.


    第二步:檢查你的酶

    酶的品質(zhì)(主要是公司的工藝好不好),活性,保質(zhì)期,buffer的凍融程度都會很大程度影響PCR擴增。因此,換一個酶是相對簡單,必須試用的方法。


    第三步:最需要實驗經(jīng)驗-引物設(shè)計

    解決了酶和cDNA的問題之后,需要進行最復雜的引物設(shè)計。引物設(shè)計是靈活的,根據(jù)目的的不同而不同。qPCR引物設(shè)計因為可以在序列上隨機選擇,因此可以使用引物設(shè)計引物進行設(shè)計,在這里我們主要詳解基因克隆的引物設(shè)計,一般包括CDS的設(shè)計,基因區(qū)的設(shè)計,非編碼區(qū)的設(shè)計等,這些片段的引物設(shè)計一般都固定在一段序列上,不能隨意更改(GC含量,TM值都只能固定在一個相對范圍內(nèi)),因此需要一定的實驗經(jīng)驗和理論基礎(chǔ),以下為詳細的解決方法。


    1.GC含量低于40%或高于60%,長度不在18-25范圍內(nèi),會出現(xiàn)引物二聚體,設(shè)計的引物不能遵循引物設(shè)計的原則怎么辦?

    答:不是所有的引物都必須遵循引物設(shè)計的原則,也不是所有遵循引物設(shè)計設(shè)計原則的都可以擴增出來。例如:GC含量為65%,長度為28,如果實在設(shè)計不了符合原則的,可以以相對符合的設(shè)計方式進行,不必全部符合。


    2.設(shè)計了好幾組引物,都不能擴增出來,怎么辦?

    酶和cDNA都確定好之后,引物仍然擴不出來條帶,對于不同的目的可以使用不同的方法。


    ①對于鑒定目的基因,只是想要確定這個基因的序列,可以這樣做:


    在引物兩端加一段堿基(5‘的序列可以自己設(shè)計),改變引物的GC含量,TM值等。


    ②對于僅需要擴增目的基因,不能在5’端添加堿基的情況,且使用F2/R2不能擴增出條帶,可以這樣做:


    先在CDS兩端設(shè)計一對引物,先使用F1/R1進行擴增。然后再使用CDS引物F2/R2進行擴增。


    ③對于表達載體,需要擴增到載體上,可以這樣做:

    1)先設(shè)計CDS區(qū)的引物F2/R2擴增,再使用這個PCR產(chǎn)物作為模版,使用帶酶切位點(藍色為酶切位點及保護堿基序列)的引物F1/R1進行擴增。


    2)改變所用的酶切位點。


    3)換連接方法。如果使用T4連接,可以換成同源重組的方法。


    安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

      

      深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。


    可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領(lǐng)域科研的老師和同仁。







產(chǎn)品中心 Products
人日本中文字幕免费精品-日本口爆吞精在线视频-玖玖玖玖视频在线观看-国产精品内射在线播放| 午夜性色福利在线视频福利-久久精品视频免费获取地址-亚洲一区二区三区在线观看不卡-无套进入美女免费观看视频| 国产精品乱码一区二区三区视频-国产自拍精品在线一区二区-五月综合丁香婷婷久久-在线国产精品一区二区三区| 欧美激情av一区二区三区-美国性感美女抠逼直播视频-亚洲国产精品视频在线播放-日本一高清二区视频久二区| 日韩欧美国产在91啦-激情偷拍自拍在线观看-一本大道久久香蕉成人网-亚洲精品中文字幕观看| 蜜桃国产精品一区二区三区-午夜理论片在线观看有码-91亚洲视频在线免费观看-自拍偷拍区一区二区三区精品区| 欧美成人国产精品137片内射-空之色水之色 在线观看-精品国产亚洲一区二区在线观看-色婷婷精品午夜在线播放| 亚洲av高清网站夜夜去-拍国产乱人伦偷精品视频-成人日韩欧美在线观看-无遮挡国产精品一级二级三级视频| 人妻少妇中文字幕久久精品-水蜜桃av一区二区三区在线观看-日韩熟女精品一区二区三区-久久国产综合激情对白| 亚洲精品国产精品乱码不-亚洲天堂精品自拍偷拍-风骚少妇久久精品在线观看-一区二区在线观看视频在线观看| 精品人妻中文字幕有码在线-亚洲欧美一区二区成人精品久久久-亚洲第一人伊狼人久久-亚洲国产欧美精品在线观看| 国语对白高清在线观看-久久av精品一区二区三区-日韩在线中文字幕不卡-免费视频成人高清观看在线播放| 日本在线无乱码中文字幕-国产美女自拍视频精品一区-精品人妻中文字幕一区二区三区-精品国产一级二级三级| 国产精品第五页在线观看-亚洲欧美日韩丝袜另类一区-国产懂色av一区二区三区-午夜亚洲欧美日韩在线| 久久成人三级一区二区三区-自拍视频在线观看成人-成人日韩在线中文字幕有码-国产黄色盗摄在线观看| 91偷自产一区二区三区精品-亚洲av一区二区三区中文-国产一级黄色性生活片-最近中文字幕在线一区二区三区| 在线观看亚洲天堂成人-亚洲大片久久精品久久精品-日韩在线免费观看毛片-成年大片免费视频播放| av午夜福利一片免费看久久-中文字幕日韩无敌亚洲精品-四虎高清成人在线观看-亚洲开心婷婷中文字幕| 精品视频在线观看免费一区二区-哪里可以看国产视频一区二区三区-亚洲天堂av在线免费观看-国产大片网站在线观看| 国产视色精品亚洲一区二区-激情艺术中心国产精品-国产农村一级特黄真人片-免费观看午夜视频在线| 亚洲国产高清一区二区三区不卡-亚洲综合小综合中文字幕-亚洲黄色成人av在线-日韩一区二区三区av观看| 女同精品女同系列在线观看-亚洲av不卡一区二区三区四区-亚洲不卡一区三区三州医院-中文字幕亚洲人妻系列| 亚洲黄色精品在线播放-国产精品对白在线播放-日韩熟女熟妇久久精品综合-人妻人妻少妇在线系列| 欧美日韩在线视频一区不卡-高清自拍最新国产精品-亚洲自偷精品视频自拍-日韩在线不卡中文字幕| 女生下面粉嫩在线视频-人妻熟女av国产在线-亚洲精品成人一区二区三区-商场偷拍女厕所撒尿视频| 精品淑女少妇av久久免费-欧美激情亚洲精品一区-九九热在线视频观看精品-亚洲天堂激情av在线| 欧美日韩在线无卡免费播v-91麻精品国产91久久久久-中文字幕亚洲综合久久菠萝蜜-久久青青草原资源福利| 毛片内射免费夫妻内射-蜜臀av人妻中文字幕-插胃管的注意事项及护理要点-青青草视频精品在线播放| 日本亚洲午夜福利视频-欧美日韩高清精品一区二区-av成人免费在线视频-日韩精品一区二区三区费暖暖| 久久av这里只有精品-国产三级视频不卡在线观看-精品亚洲综合久久中文字幕-在线观看日韩av系列| 色和尚在线视频久天天-少妇高潮太爽了在线免费观看-伊人久久大香线蕉午夜av一区-亚洲国产精品不伦不卡| 国产好大好硬好爽好湿免费视频-国产精品一区二区精品一区二区-白白色发布在线播放国产-99久久国产精品成人观看| 十八禁黄网站免费观看在线-欧美日韩精品久久久免-黄色av免费在线观看网站-国产在线高清一区二区三区av| 久久精品国产普通话对白-丰满人妻中文字幕一区二区-国产日本精品视频在线观看-香港免费毛片在线观看| 日韩国产自拍在线视频-亚洲av午夜激情在线播放-午夜福利你懂的在线观看-少妇特殊按摩高潮惨叫| 91高清在线观看播放-av在线免费观看男人天堂-九九热在线视频免费观看-美女脱内裤露出隐私部位| 青草青青视频精品在线-久热这里只有精品视频免费-免费av一级国产精品-尤物视频网站在线播放| 极品美女色诱视频在线-欧美久久天天综合香蕉伊-久久精品人人澡夜夜澡-亚洲一区二区三区四区伦理| 福利午夜视频在线观看-亚洲国产精品久久av麻豆-人妻被中出忍不住呻吟-国产极品尤物在线精品福利一区| 日韩毛片精品一区二区-无套内谢少妇高潮毛片些-国产精品午夜激情视频-亚洲天码一区二区三区| 亚洲一区日韩精品在线观看-精品人妻少妇一区二区免费蜜桃-国产三区四区五区在线观看-真正国产熟女免费视频|