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    消除微生物污染

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-06  點(diǎn)擊次數(shù): 882次

    原理

    通過沖洗單層培養(yǎng)物或通過離心重懸非貼壁細(xì)胞,以高濃度抗生素清洗培養(yǎng)物數(shù)次,然后將培養(yǎng)物傳代,用加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,再用不加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,每次傳代后都要檢測(cè)是否污染。

    材料與儀器

    DBSS
    高濃度抗生素培養(yǎng)液
    用于傳代培養(yǎng)的材料 帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡 用于支原體染色的材料

    步驟

    1. 仔細(xì)收集污染培養(yǎng)液,如有可能,應(yīng)測(cè)試該有機(jī)體對(duì)一系列抗生素的敏感性,如果做不到,則應(yīng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

    2. 用 DBSS 沖洗細(xì)胞(每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個(gè)對(duì)數(shù)級(jí),除非污染物黏貼在細(xì)胞上)。

    (a)對(duì)于單層培養(yǎng)物,用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物三次,然后用胰蛋白酶處理,再用 DBSS 通過離心與再懸浮清洗細(xì)胞兩次以上。

    (b)對(duì)于懸浮培養(yǎng)物,通過離心和重懸,用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物 5 次。

    3. 將細(xì)胞以盡可能低而又合適的細(xì)胞濃度接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

    4. 加入含高濃度抗生素的培養(yǎng)基,每兩天換一次。

    5. 用高濃度抗生素培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    6. 重復(fù)進(jìn)行 1~4 的步驟,傳代培養(yǎng)三次。

    7. 移去抗生素,在無抗生素情況下,將這些細(xì)胞再進(jìn)行三次傳代培養(yǎng)。

    8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養(yǎng)物。

    9. 對(duì)這些細(xì)胞再進(jìn)行兩個(gè)月的培養(yǎng),不加抗生素,檢査以確定所有污染已被消除。

    常見問題

    一般的原則是應(yīng)將污染的培養(yǎng)物丟棄,而不要試圖去除污染,除非是至關(guān)重要必須保留的細(xì)胞系才考慮去除污染。在任何情況下,很難做到完-全消除污染。特別是在酵母污染時(shí),如果試圖去除污染,可能導(dǎo)致產(chǎn)生更頑固的對(duì)抗抗生素的細(xì)胞。


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