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    多能ES細(xì)胞的培養(yǎng)

    發(fā)布時間: 2022-12-01  點擊次數(shù): 1018次

    材料與儀器

    PBS 胰酶溶液
    MEF 滋養(yǎng)板 巴斯德吸管 ES 生長培養(yǎng)基

    步驟

    1. 準(zhǔn)備下列試劑和材料:

    60 mm MEF 滋養(yǎng)板(接種不能超過 7 天)

    帶棉塞無菌巴斯德吸管

    無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

    ES 生長培養(yǎng)基

    胰酶溶液

    2. PBS 沖洗 ES 細(xì)胞,巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養(yǎng)皿底(2 ml/p60)

    3. 37℃ 孵育 5 分鐘左右,至細(xì)胞脫落。

    4. 巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細(xì)胞 4~6 次,分散 ES 細(xì)胞。分散的細(xì)胞,包括單細(xì)胞和小的細(xì)胞團,轉(zhuǎn)移至裝有 2 ml 預(yù)熱(37℃)ES 生長培養(yǎng)基的 15 ml 離心管。

    5. 離心收集細(xì)胞。吸掉上清,留約兩倍于細(xì)胞沉淀的體積。輕彈離心管懸浮細(xì)胞。加 10 ml ES 生長培養(yǎng)基,吹吸至懸液均勻。

    6. 計數(shù)細(xì)胞。由于 ES 細(xì)胞較 MEF 細(xì)胞小,呈圓形,二者很容易區(qū)分。

    7. ES 細(xì)胞接種 60 mm MEF 滋養(yǎng)板。吸掉 MEF 滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基,加入懸于 5 ml ES 生長培養(yǎng)基的 ES 細(xì)胞。

    8. 每天換一次液,加 5 ml ES 生長培養(yǎng)基。



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