養(yǎng)細(xì)胞是一件勞心勞力的事。要像照顧小孩一樣仔細(xì)對待，愛護(hù)它，呵護(hù)它。這次就來講講細(xì)胞培養(yǎng)常見問題的原因及解決辦法。

• 培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子

• 支原體污染

• 蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解釋放 DNA

• 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液

• 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物

• 用 DNase I 處理細(xì)胞

• 原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染

• 培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織

• 由于更換不同培養(yǎng)液或血清

• 培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞

• 培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染

• 試劑保存不當(dāng)

• 接種細(xì)胞起始濃度太低，細(xì)胞已老化

• 支原體污染

• 比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)。讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液

• 換入新鮮配制培養(yǎng)液。補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子

• 用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物。或用抗生素除菌

• 血清需保存在 -5 ℃ 到 -20 ℃。培養(yǎng)液需在 2~8 ℃ 避光保存。含血清*培養(yǎng)液在 2~8 ℃ 保存，并在 2 周內(nèi)用完

• 增加接種細(xì)胞起始濃度，換用新的保種細(xì)胞

• 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物
  

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。

而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是「小黑點(diǎn)」，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在 37 ℃ 環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

GIBICO 的胎牛血清沒有預(yù)老化，儲存在 2~8 ℃ 時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在 -20 ℃ 儲存胎牛血清，避免反復(fù)凍融。

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