日本一区二区三区在线网站,精品国产一区二区三区四区在线观看

技術(shù)文章ARTICLE

您當(dāng)前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明

免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明

發(fā)布時間： 2022-10-09　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1028次

　　對于免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗，我們拿脂質(zhì)體為例，其作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。
　　具體實操時的步驟如下：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃二氧化碳培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
　　2.轉(zhuǎn)染液在EP管中制備(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)：
　　A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug質(zhì)粒DNA；
　　B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
　　分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
　　3.吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
　　4.轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
　　5.轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃恒溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
　　6.瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。

下一篇：為什么細(xì)胞培養(yǎng)需要用到胎牛血清？

上一篇：原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染操作指導(dǎo)

產(chǎn)品中心 Products

91精品国产91热久久久久福利,后入式日本美女午夜视频在线观看,久久久久久久久夜精品,亚洲欧美另类唯美清纯

免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染實操時的幾大步驟說明