核酸提取的方法

發(fā)布時間： 2021-10-22　　點擊次數(shù)： 1572次

核酸是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對象，因此核酸的提取是分子生物學(xué)實驗技術(shù)中最重要、最基本的操作。

核酸提取系列目錄

一、DNA提取方法簡介

二、DNA提取常見問題、原因分析及其對策

三、RNA提取方法簡介

四、RNA提取及其RT-PCR常見問題、原因分析及其對策

一、DNA提取方法簡介

1、基因組DNA的提取	1.1、CTAB法
	1.2、SDS法
	1.3、其它
2、非基因組DNA的提取	2.1、質(zhì)粒DNA的提取	2.1.1、堿裂解法
		2.1.2、煮沸法
	2.2、線粒體、葉綠體DNA的提取	差速離心結(jié)合SDS裂解法

1、基因組DNA的提取

1.1、CTAB法

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三呷基溴化銨)，是一種陽離子去污劑，可溶解細胞膜，并與核酸形成復(fù)合物。

具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在這種條件下，蛋白質(zhì)和中性多聚糖仍留在溶液里。

該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。

注：CTAB溶液在低于15℃ 時會形成沉淀析出，因此在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱，且離心時溫度不要低于15℃。

CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方

Tris-HCl （pH8.0）提供一個緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞；

EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase活性；

NaCl 提供一個高鹽環(huán)境，使DNP（脫氧核糖核蛋白）；

CTAB溶解細胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離；

β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除。

CTAB提取緩沖液的改進配方

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少DNA中酚的污染；同時它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖。

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）

PVP 按其平均分子量大小分為四級，習(xí)慣上常以K值表示，不同的K值分別代表相應(yīng)的PVP平均分子量范圍。K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關(guān)的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關(guān)的物理量，因此可以用K值來表征PVP的平均分子量。通常K值越大，其粘度越大，粘接性越強。

在研磨過程中加入PVP，其中的CO-N=基有很強的結(jié)合多酚的能力，從源頭上減少了酚類被氧化的機會。

同時向抽提液中加入還原劑β-巰基乙醇，后者能打斷多酚氧化酶中的二硫鍵，使多酚不易被氧化，隨后經(jīng)抽提而去除。

CTAB法流程圖

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