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    qPCR實驗結(jié)果分析基本步驟(一)

    發(fā)布時間: 2021-10-15  點擊次數(shù): 11105次

    實時熒光定量PCR實驗會產(chǎn)生大量實驗數(shù)據(jù),一般可以用PCR儀自帶的軟件進行收集、分析。但即使有了方便可靠的軟件,我們也需要對原始數(shù)據(jù)進行檢查、再分析,評估數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。


    這需要三個基本的步驟。


    第一步,查看擴增曲線,有必要時調(diào)整基線和閾值。

    qPCR實驗結(jié)果分析基本步驟(一)

    Ct值由基線和閾值計算得來,所以他們的值對結(jié)果影響很大。軟件會給出1個默認的基線和閾值,但不一定是最合適的,需要我們進行手動調(diào)整。

    首*行基線的調(diào)整。


    一般范圍是循環(huán)數(shù)3~15,使得靶基因的擴增信號大于背景噪聲。出現(xiàn)不正常的擴增曲線,通常是因為設(shè)置了不正常的基線,需要對單個孔進行設(shè)置。


    比較好的做法是,基線的最小值(起始循環(huán)數(shù))設(shè)置在背景噪聲的尾巴后,最大值(結(jié)束循環(huán)數(shù))設(shè)置為擴增起始點。


    循環(huán)范圍在5個循環(huán)就可以,具體跟擴增曲線的對數(shù)圖來設(shè)定。


    擴增曲線的對數(shù)圖是什么?下期告訴你



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