-
U937細胞高效率轉染條件分享
發(fā)布時間: 2021-08-23 點擊次數: 1202次一、轉染材料準備
1. 轉染試劑用量:10ul
2. DNA/siRNA濃度:電訊
3. 細胞密度:1*106-1*105
4. 轉染用培養(yǎng)板:6孔板
5. 轉染試劑:zeta life ,Advanced DNA RNA轉染試劑;貨號:AD600025
6. 轉染時間:15小時
7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清
8. 細胞凍存液:L0100無血清細胞凍存液
注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。操作過程:
1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉染。
2. 核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。
3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。
4.細胞換液:轉染24小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。
5.分析結果:質粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率,48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率,48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。
- 下一篇:Thp-1細胞高效率轉染條件分享
- 上一篇:如何預測新基因編碼蛋白的氨基酸序列
產品中心
Products