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血清沉淀是否會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)?如何避免?
發(fā)布時(shí)間: 2021-08-18 點(diǎn)擊次數(shù): 1395次血清是細(xì)胞培養(yǎng)試劑中最基礎(chǔ)普遍的試劑之一,之前我們已經(jīng)介紹過(guò)了有關(guān)特殊加工工藝血清的一些小知識(shí)(了解和認(rèn)識(shí)胎牛血清,特殊加工工藝血清,您知道幾種?),那么今天我們將繼續(xù)了解有關(guān)血清沉淀與血清熱滅活的相關(guān)知識(shí)~
血清沉淀是否會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)?如何避免?
血清沉淀
1. 血清沉淀是什么? 血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀,其成分有多種類(lèi)型,產(chǎn)生的原因有很多。主要有纖維蛋白(絮狀沉淀)、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘連蛋白、磷酸鈣(顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀)、膽固醇等。
●纖維蛋白(Fibrin)
血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類(lèi)型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中,血清采集、過(guò)濾(3 次 0.1μm過(guò)濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
▲ 纖維蛋白沉淀圖
●磷酸鈣(Calcium Phosphate)
這是一種常見(jiàn)的沉淀成分,通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)血清在 37℃保存時(shí),這種現(xiàn)象尤其明顯,在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動(dòng)的作用下四處游動(dòng),常被誤認(rèn)為是微生物污染。
●其他成分(Other)
血清中的其他成分也會(huì)形成沉淀,例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。
2. 沉淀是如何形成的?
造成沉淀的主要原因是溫度的改變、熱滅活、反復(fù)凍融、長(zhǎng)期儲(chǔ)存于2-8℃或者室溫。
3. 血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎?
我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測(cè)試,確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測(cè)試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明,其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多用戶(hù)和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂。一般情況下,當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí),常將其存放在 4℃冰箱中觀察,并考慮接下來(lái)是否繼續(xù)使用。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多,反而會(huì)使血清更加渾濁,進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且,在倒置顯微鏡下,可在血清中觀察到小黑點(diǎn)(磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)),更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類(lèi)誤解的產(chǎn)生,我們不建議用戶(hù)培養(yǎng)血清來(lái)驗(yàn)證是否存在污染,而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且,進(jìn)行革蘭氏染色,并在油鏡(100 X 10 倍)下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。
Zeta Life血清經(jīng)過(guò)3次0.1μm過(guò)濾除菌,低內(nèi)毒素,通過(guò)血紅蛋白測(cè)試合格,經(jīng)美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)認(rèn)證。
4. 如何避免血清沉淀 ●正確解凍
首先,應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清:從-20℃取出后,置于4℃冰箱緩慢解凍,最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍,則非常容易產(chǎn)生沉淀。在解凍過(guò)程中,請(qǐng)注意,應(yīng)時(shí)不時(shí)緩慢搖晃血清瓶,可減少沉淀的產(chǎn)生。為避免反復(fù)凍融,建議您將血清分裝使用。
●使用和保存注意事項(xiàng)
血清沉淀很難預(yù)測(cè)和避免,出現(xiàn)沉淀后也無(wú)需擔(dān)憂,這并不會(huì)影響血清的品質(zhì)。已知血清沉淀在以下條件下會(huì)有增多的可能:
1) 熱滅活;
2) 37℃培養(yǎng);
3) 反復(fù)凍融;
4) 伽馬射線照射;
5) 2-8℃長(zhǎng)期保存;
6) 長(zhǎng)期保存于可自動(dòng)化霜的冰箱中(溫度不穩(wěn)定);
●血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣,具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)和控制血清沉淀的產(chǎn)生。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象,這一點(diǎn)可以在各品牌網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問(wèn)題的聲明上得到證實(shí)。
5. 有沉淀時(shí)如何處理?
我們建議您采用2000rpm離心5分鐘,取上清使用就好,比過(guò)濾方便,不需要另外準(zhǔn)備濾芯和針筒,且不容易污染。
總結(jié)建議
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于正常現(xiàn)象,不會(huì)影響到血清的品質(zhì),對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)也不會(huì)產(chǎn)生影響,大家可以放心使用,若不立即使用,血清應(yīng)保存在-20℃以下。
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